Purificación del factor de crecimiento expresado como proteína de fusión en E. coli.

Španielsky jazyk

Purificación del factor de crecimiento expresado como proteína de fusión en E. coli.

Vydavateľstvo: Ediciones Nuestro Conocimiento
Rok vydania: 2021
Formát: Paperback
Rozmer: 220 x 150 mm
Jazyk: Španielsky jazyk
ISBN: 9786203658071

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O knihe

Eschericia coli es un hospedador de uso frecuente, ya que facilita la expresión de proteínas por su relativa simplicidad, su cultivo económico y rápido de alta densidad, la genética bien conocida y la gran cantidad de herramientas moleculares compatibles disponibles. Se ha observado que las etiquetas de afinidad mejoran el rendimiento de proteínas, previenen la proteólisis y aumentan la solubilidad in vivo. La purificación de proteínas marcadas con his se basa en el uso de un ión metálico quelado como ligando de afinidad. Las enteroquinasas se utilizan generalmente para la digestión de proteínas de fusión ya que escinden la diana en el lado C terminal de la secuencia de reconocimiento, lo que permite la eliminación completa de las secuencias de etiquetas de afinidad. Se realizó un estudio en el que las células de E. coli se lisaron mediante ultrasonidos para recuperar la proteína de fusión soluble y luego se filtraron mediante filtración de flujo tangencial (TFF) utilizando un módulo de casete de placa plana. La proteína filtrada se purificó usando cromatografía de intercambio aniónico seguida de cromatografía de pseudo afinidad. La proteína de fusión se escindió mediante digestión con enteroquinasa recombinante para separar la pareja de fusión de la proteína de interés. Se encontró que la recuperación total de la proteína deseada era del 24,7%.